Génétique Moléculaire

Le département de génétique moléculaire identifie à des fins cliniques les mutations et génotypes responsables de pathologies héréditaires. En sus de la détection de mutations pathogènes, des analyses de statut de porteur et de prédisposition aux maladies multifactorielles sont menées. Maladies monogéniques (thalassémie, FMF), maladies multifactorielles (cancers) et maladies mitochondriales (LHON) y sont analysées.

Voici quelques-unes des techniques utilisées dans notre centre pour les analyses génétiques de routine :

• RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphisms)
• PCR (Polymerase Chain Reaction)
• Séquençage (Analyse de séquence)
• RT-PCR (Real Time PCR)
• Analyse d'hétéroduplex

RFLP

Cette méthode repose sur la digestion de l'ADN par des enzymes de restriction qui coupent au niveau de séquences spécifiques de nucléotides. Si une mutation survient au site de reconnaissance de l'enzyme, celle-ci ne coupe plus ou génère un nouveau site de clivage. Les fragments résultants sont visualisés par électrophorèse sur gel, permettant d'identifier la mutation par la modification des profils de bandes. C'est une technique couramment employée pour les maladies monogéniques.

PCR

La réaction en chaîne par polymérase (PCR) est une technique de biologie moléculaire in vitro permettant d'amplifier de manière exponentielle des millions de copies d'une région ciblée de l'ADN à l'aide d'amorces spécifiques. Elle est couramment utilisée pour le diagnostic des maladies héréditaires, la détection d'agents infectieux et les analyses d'identité génétique.

• 1. Dénaturation :
• L'ADN double brin est séparé en simples brins sous l'effet d'une température élevée (généralement 94–95 °C).
• 2. Hybridation :

Analyse de séquence

L'analyse de séquence consiste à déterminer l'ordre précis des nucléotides composant une région d'ADN donnée. Les altérations nucléotidiques des gènes, appelées mutations, sont responsables de diverses affections héréditaires. En séquençant la région génique impliquée, l'emplacement exact de la mutation est caractérisé. L'évolution des séquenceurs a considérablement raccourci les délais d'analyse. Ces approches sont utilisées pour le diagnostic formel de nombreuses maladies monogéniques telles que la bêta-thalassémie et la fièvre méditerranéenne familiale (FMF).

PCR en temps réel

La PCR en temps réel est un dispositif qui suit l'amplification cycle par cycle grâce à l'émission de signaux fluorescents proportionnels à la quantité de produit synthétisé. Elle permet de quantifier les produits de PCR de façon simultanée et continue. Elle est très employée en hématologie moléculaire et pour le diagnostic des infections.

Analyse d'hétéroduplex

L'analyse d'hétéroduplex est une méthode qui détecte les divergences de séquence entre un ADN de référence (témoin sain) et un ADN porteur d'une mutation. Les deux ADN sont mélangés, dénaturés thermiquement puis refroidis pour favoriser leur hybridation. En cas de différence de séquence, les bases non appariées créent une déformation locale (hétéroduplex). Les hétéroduplex migrant plus lentement que les homoduplex lors de l'électrophorèse, ils se distinguent aisément.